Иммуноферментный анализ — различия между версиями

Версия 10:40, 17 августа 2015

Иммуноферментный анализ‏‎ (сокр. ИФА) – это иммунологический лабораторный тест, осуществляющийся на основании специфичной реакции «антиген-антитело», и используемый для определения качественного или количественного состава вирусов, макромолекул и т.п. Обнаружение образовавшейся связки проводится при помощи использования фермента, выступающего в качестве метки с целью регистрации сигнала. Материалом для осуществления иммуноферментного анализа может быть венозная кровь, моча, околоплодные воды и пр.

Принцип действия

Если в человеческий организм попадает чужой агент (антиген), иммунная система начинает выработку белков (антител), необходимых для ликвидации антигенов. Происходит выборочное соединение антител и антигенов и появляются связки «антиген-антитело». При осуществлении иммуноферментного анализа такие комплексы и подлежат количественному, а также качественному анализу. Например, при необходимости выявления вируса (точнее – антигена вируса) в крови, в последнюю добавляются специфичные к такому вирусу антитела. Соответственно, для обнаружения антител добавляют специфичные антигены в образцы крови пациента. При помощи ИФА крови можно обнаружить антитела разнообразных видов (иммуноглобулины классов G, M, A). Эти антитела накапливаются в разные временные промежутки. Так, на 5 день после начала болезни начинается накопление иммуноглобулина М, через 3-4 нед. - иммуноглобулина G, по истечении 2-4 нед. - иммуноглобулина А. В зависимости от изменения количества выявленных антител и делается вывод о текущем сотоянии пациента.

Классификация

В связи с множеством исследуемых объектов – начиная молекулярными соединениями и заканчивая бактериями, вирусами, а также по причине разных условий диагностики ИФА, существует много вариантов осуществления данного метода. Возможно деление на подвиды по виду иммунохимического взаимодействия на начальной стадии анализа. Так, если в системе есть лишь анализируемое соединение и центры связывания, которые соответствуют ему (специфичные антитела, а также антиген), то метод именуется неконкурентным. Если на изначальном этапе в системе одновременно есть анализируемое соединение плюс его аналог (помеченное ферментом или иммобилизированное в твердой фазе анализируемое соединение), которые конкурируют за определенный лимит центров специфического связывания, такой метод именуется конкурентным.

Примером неконкурентного вида иммуноферментного анализа является «сэндвич-метод». Среди конкурентных видов иммуноферментного анализа основными являются прямой конкурентный формат и непрямой конкурентный формат.

Преимущества и недостатки

Иммуноферментный анализ‏‎ имеет такие преимущества:

• высокая точность и чувствительность;
• возможна ранняя диагностика;
• выслеживание динамики воспалительных реакций;
• удобство;
• возможность получения скорого ответа.

Главным минусом иммуноферментного анализа‏‎ является возможность получения в редких случаях ложноотрицательных или же ложноположительных результатов. Ложноположительные результаты могут возникнуть в связи с ревматоидным фактором, за счет антител при разных системных заболеваниях, при нарушениях обмена и пр. Ложноотрицательные результаты могут обуславливаться иммунодефицитом или техническими ошибками.

Сфера применения

ИФА используют в таких диагностических целях:

• диагностика вирусных инфекций (гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция и др.);
• передающиеся половым путем инфекции (гонорея, хламидиоз, уреаплазмоз и т.п.);
• сифилис;
• онкомаркеры;
• диагностика аллергии, а также иммунодефицитных состояний.