Дот-гибридизация
Дот-гибридизация (Дот блот, дот блоттинг) – это метод лабораторной диагностики, позволяющий выявить вирусную или бактериальную нуклеиновую кислоту (ДНК). Результаты дот-гибридизации являются прямым подтверждением или опровержением того, что в организме находится возбудитель определённой инфекции. Кроме того, с помощью этой методики можно контролировать ход лечения и его эффективность.
Особенности дот-гибритизации
Для выявления сторонней ДНК из исследуемых образцов нужно выявить суммарную ДНК. С этой целью исследуемые и контрольные образцы денатурируют с помощью кипячения. Потом их нужно зафиксировать на нитроцеллюлозном фильтре для дальнейшей гибридизации с заранее подготовленным денатурированным биотиновым ДНК-зондом. Тот зонд, что не связался, удаляют из материала при помощи отмывки фильтра.
В следующей фазе фильтр нужно обработать коньюгатом страптавидина. Он должен быть со щелочной фосфатазой.
Последний этап – это внесение субстратного раствора. Если соответствующие точки окрасились, то говорят о том, что тестируемая ДНК есть в исследуемом биологическом материале. Истинные образцы должны иметь ту же по интенсивности окраску, что и контрольные.
Преимущества метода дот-гибритизации
Данный способ имеет достаточно много преимуществ в сравнении с остальными методами идентификации. Особенно ценна дот-гибритизация, когда внешний диагностический признак проявляется слабо или его вообще нет. Поскольку в генетическом материале глобальные изменения – это редкое явление, то ложноотрицательный результат ничтожно минимален.
Также применение зондов, на котором строится методика дот-гибритизации, позволяет обнаружить те микроорганизмы, которые сложно культивировать вне живого организма.
Зонд позволяет отличить вирулентные штаммы от авирулентных. Это во многом определяет схему лечения.
Ещё одно из преимуществ – это оперативная идентификация вируса или бактерии непосредственно в биологическом материале, независимо от способа его хранения.
Для проведения исследования нет необходимости оправлять образцы в специализированные институты. И это при высокой достоверности выявления даже единичных микробных клеток.
| Методы диагностики в гинекологии | ||
|---|---|---|
| Аппаратные методы | Видеокольпоскопия • Вульвоскопия • Гистероскопия • Гистеросальпингография • Кольпомикроскопия • Кольпоскопия • УЗИ • Хромокольпоскопия • Шиллер-тест • Эхогистеросальпингография | |
| Лабораторные методы | MAR-тест • NASBA тест • Дот-гибридизация • Иммуноферментный анализ • Иммунофлуоресцентный анализ • ПАП-тест • ПЦР-диагностика | |
| Методы диагностики в урологии | ||
|---|---|---|
| Аппаратные методы | Биотезиометрия • Допплерография • ТРУЗИ • Ультразвуковая диагностика • Уретрография • Уретроскопия • Урофлоуметрия • Цистоскопия | |
| Лабораторные методы | MAR-тест • NASBA тест • Дот-гибридизация • Иммуноферментный анализ • Иммунофлуоресцентный анализ • ПЦР-диагностика • Спермограмма | |
| Методы диагностики инфекций |
|---|
| ПЦР-диагностика • Иммуноферментный анализ • Дот-гибридизация • Иммунофлуоресцентный анализ • NASBA тест ЗППП • Простатит • Воспалительные заболевания |
|
